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优化ELISA结果，稳健的洗涤技术是关键
249 人阅读发布时间：2023-08-15 09:59
酶联免疫吸附分析（ELISA）是一种测量溶液中抗原浓度的常用方法，已被用于从HIV诊断和妊娠测试到更精细的抗体、抗原和蛋白质测量的各种应用中。它的检测原理是基于固定在固相上的特异性抗体的结合，这些抗体的酶促反应产生可测量的读数，进而量化溶液中的目标蛋白质。
因此，优化ELISA结果，洗涤是关键之一。
ELISA方案在每个反应步骤后包含多个洗涤循环，洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。
非接触式微孔板样品处理系统C.WASH通过离心力可以轻柔移除微孔板上的液滴，并完成液体分配步骤，在效率、时间、节约耗材等各方面有效提升ELISA洗涤环节。以下案例展示了C.WASH在ELISA工作流程中的应用：
案例一
使用C.WASH比较荧光素溶液填充的微孔板洗涤前后的荧光值以确定洗涤效率。定义一个洗涤循环为通过离心旋转去除板中的液体，然后分配液体。
图2. 在96孔板中以不同转速进行一或两次洗涤循环后的洗涤效率。图中所示的值是从96个数据点得出的平均值。
图4. 以不同转速旋转后，96孔（绿色）和384孔（蓝色）板中的残余体积。图中所示的值是从96个数据点得出的平均值。
实验结论：
1.C.WASH仅在一个洗涤循环后即可实现非常高的洗涤效率（洗涤效率>99.5%）。
2.经过两次洗涤循环后，C.WASH几乎完全去除了荧光信号（洗涤效率>99.99%）。
案例二
使用ELISA试剂盒检测受刺激的THP-1细胞分泌到上清中的TNF-α（一种调节免疫细胞活动的细胞因子），比较工作流程中C.WASH和手动清洗微孔板的洗涤效率。
实验结果：
1.C.WASH与传统的手动清洗相比，得到的实验数据质量相当，但C.WASH大大减少了洗涤循环次数，不仅缩短实验时间，也大量节省了试剂和枪头消耗。
2.C.WASH自动化操作使实验结果具有高度可重复性，清洗后液体残留体积比传统洗板机或手动拍板少10倍以上。低残留体积导致背景信号减少，实验数据质量更高。
C.WASH可以做什么？
加快工作流程
在数秒钟内即可从96、384和1536孔板中去除液体。
自动化操作
使用自动化设备（SILA2）实现工作流程的未来化。
避免交叉污染
非接触式去除液体减少了样品与污染物混合的机会，确保了测试过程中产生的数据准确可靠。
因此，优化ELISA结果，洗涤是关键之一。
ELISA方案在每个反应步骤后包含多个洗涤循环，洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。
非接触式微孔板样品处理系统C.WASH通过离心力可以轻柔移除微孔板上的液滴，并完成液体分配步骤，在效率、时间、节约耗材等各方面有效提升ELISA洗涤环节。以下案例展示了C.WASH在ELISA工作流程中的应用：
案例一
使用C.WASH比较荧光素溶液填充的微孔板洗涤前后的荧光值以确定洗涤效率。定义一个洗涤循环为通过离心旋转去除板中的液体，然后分配液体。
图1. C.WASH工作流程图
图2. 在96孔板中以不同转速进行一或两次洗涤循环后的洗涤效率。图中所示的值是从96个数据点得出的平均值。
图3. 在384孔板中以不同转速进行一或两次洗涤循环后的洗涤效率。图中所示的值是从96个数据点得出的平均值。
图4. 以不同转速旋转后，96孔（绿色）和384孔（蓝色）板中的残余体积。图中所示的值是从96个数据点得出的平均值。实验结论：
1.C.WASH仅在一个洗涤循环后即可实现非常高的洗涤效率（洗涤效率>99.5%）。
2.经过两次洗涤循环后，C.WASH几乎完全去除了荧光信号（洗涤效率>99.99%）。
案例二
使用ELISA试剂盒检测受刺激的THP-1细胞分泌到上清中的TNF-α（一种调节免疫细胞活动的细胞因子），比较工作流程中C.WASH和手动清洗微孔板的洗涤效率。
图5.手动清洗和C.WASH清洗工作流程图
图6.手动清洗（蓝色）和C.WASH（绿色）清洗测量TNF-α浓度结果
图7. 两种清洗方案TNF-α标准溶液的校准曲线
（手动清洗为蓝色，C.WASH清洗为绿色），所示数据为三次测量得出的平均值。
（手动清洗为蓝色，C.WASH清洗为绿色），所示数据为三次测量得出的平均值。
表1. 两种方案中时间和移液枪头消耗比较
实验结果：
1.C.WASH与传统的手动清洗相比，得到的实验数据质量相当，但C.WASH大大减少了洗涤循环次数，不仅缩短实验时间，也大量节省了试剂和枪头消耗。
2.C.WASH自动化操作使实验结果具有高度可重复性，清洗后液体残留体积比传统洗板机或手动拍板少10倍以上。低残留体积导致背景信号减少，实验数据质量更高。
C.WASH可以做什么？
加快工作流程
在数秒钟内即可从96、384和1536孔板中去除液体。
自动化操作
使用自动化设备（SILA2）实现工作流程的未来化。
避免交叉污染
非接触式去除液体减少了样品与污染物混合的机会，确保了测试过程中产生的数据准确可靠。